Koks yra ddNTP naudojimo tikslas?
Koks yra ddNTP naudojimo tikslas?

Video: Koks yra ddNTP naudojimo tikslas?

Video: Koks yra ddNTP naudojimo tikslas?
Video: Sanger sequencing 2024, Lapkritis
Anonim

DdNTP nurodo Dideoksinukleotidai trifosfatai, kurie naudojami Sanger dideoxy metodu, norint pagaminti skirtingo ilgio DNR grandines DNR sekos nustatymui. Dėl to DNR polimerizacijos (arba DNR pailgėjimo) procesas baigiasi, nes šiam procesui tęsti reikia 3'-OH grupės.

Taigi, kodėl ddNTP naudojami sekos nustatymui?

Dideoksinukleotidai yra grandinės ilginantys DNR polimerazės inhibitoriai, naudojamas Sangerio metodu DNR sekos nustatymas . Dideoksiribonukleotidai neturi 3' hidroksilo grupės, todėl grandinės pailgėjimas negali įvykti, kai šis dideoksinukleotidas yra grandinėje. Tai gali sukelti DNR nutraukimą seka.

Panašiai, ar ddNTP prisijungia prie dNTP? Vienas ar daugiau iš dNTP yra radioaktyviai paženklinti, kad būtų lengviau vizualizuoti replikacijos produktus. Galiausiai kiekvienas mėgintuvėlis gauna vieną iš keturių specialių nukleotidų, vadinamų dideoksinukleotidai ( ddNTP ). Tačiau įtraukta DNR polimerazė negali toliau išplėsti grandinės, nes jai reikia 3'-OH prikabinti prie kito nukleotido.

Panašiai galima paklausti, kaip ddNTP sustabdo sekos nustatymo reakciją?

Kai yra nedideliais kiekiais sekos reakcijos didezoksiribonukleozido trifosfatai ( ddNTP ) nutraukti sekvenavimo reakcija skirtingose augančių DNR grandžių vietose. ddNTP sustabdo sekos nustatymo reakciją nes jie: priverčia DNR polimerazę nukristi nuo šabloninės grandinės. c.

Kokia technika, apimanti dideoksinukleotidus, gali būti naudojama?

Sangerio seka yra a metodas DNR sekos nustatymas, pagrįstas selektyviu grandinės užbaigimo įtraukimu dideoksinukleotidai DNR polimerazė in vitro DNR replikacijos metu. Sukūrė Frederickas Sangeris ir kolegos 1977 m., jis buvo plačiausiai paplitęs naudojamas sekos nustatymas metodas maždaug 40 metų.

Rekomenduojamas: