Kas atsitiks, jei pridėsite per daug restrikcijos fermento?
Kas atsitiks, jei pridėsite per daug restrikcijos fermento?

Video: Kas atsitiks, jei pridėsite per daug restrikcijos fermento?

Video: Kas atsitiks, jei pridėsite per daug restrikcijos fermento?
Video: Ферменты – биологические катализаторы. Значение ферментов. Видеоурок по биологии 10 класс 2024, Lapkritis
Anonim

Gali atsirasti nepilnas virškinimas kai per daug arba taip pat mažai fermentas yra naudojamas. The teršalų buvimas viduje į DNR mėginys gali slopinti fermentai o tai taip pat sukelia nepilną virškinimą. Kai kurie restrikcijos fermentai reikia kofaktorių pilnai veiklai.

Be to, kodėl restrikcijos fermentai pridedami paskutiniai?

The restrikcijos fermentas paprastai yra paskutinis komponentas pridėta į reakciją, siekiant užtikrinti, kad jis nebūtų veikiamas ekstremaliomis sąlygomis. Surinktą reakciją reikia sumaišyti po to fermentas papildymas. Sumaišykite visus tirpalus, kurių sudėtyje yra restrikcijos fermentai švelniai vengti fermentas inaktyvavimas.

Be to, kaip galima pagerinti restrikcijos fermentų virškinimą? Naudokite ne daugiau nei rekomenduojama fermentas suma (pvz., 10 vnt fermentas vienam mikrogramui DNR). Sumažinti kiekį fermentas reakcijoje, jei reikia. Venkite ilgo inkubavimo virškinimas reakcija. Naudokite rekomenduojamą reakcijos buferį.

Taip pat žinokite, kodėl restrikcijos fermentas nesumažėtų?

Skaldomos DNR paruošimas turėtų neturi būti teršalų, tokių kaip fenolis, chloroformas, alkoholis, EDTA, ploviklių arba per daug druskų, kurie gali trukdyti restrikcijos fermentas veikla. Jei yra inhibitorių (dažnai druskos, EDTA arba fenolio), kontrolinė DNR tai padarys nenupjauta po sumaišymo.

Kodėl fermento kiekis gali sukelti žvaigždžių aktyvumą?

Žvaigždžių veikla yra apribojimo specifikos sušvelninimas arba pakeitimas fermentas tarpininkaujantis DNR skilimas, kuris gali vyksta reakcijos sąlygomis, kurios labai skiriasi nuo optimalių fermentas . Žvaigždžių veikla gali atsiranda dėl Mg buvimo2+, kaip yra matomas, pavyzdžiui, HindIII.

Rekomenduojamas: