Turinys:

Kodėl prieš nustatant seką būtina išgryninti PGR produktus?
Kodėl prieš nustatant seką būtina išgryninti PGR produktus?

Video: Kodėl prieš nustatant seką būtina išgryninti PGR produktus?

Video: Kodėl prieš nustatant seką būtina išgryninti PGR produktus?
Video: Je vous parle de l aspirateur NEWA 2024, Lapkritis
Anonim

Norimo patikrinimas produktas yra esminis , kuris apima nespecifinio trūkumo patvirtinimą Produktai ir grunto dimeriai. Švarus Taip pat yra reakcijos mišinio padidėjimas būtina pašalinti neįtrauktus pradmenis ir dNTP, kurie gali trukdyti tolesnėms reakcijoms ir sukelti neįskaitomą seką.

Be to, kodėl būtina išvalyti PGR produktus?

Tau reikia išvalyti PGR produktus atsikratyti nepanaudotų pradmenų, nukleotidų ir fermentų, siekiant optimizuoti ligavimo sėkmę, kuri išlaikys ir seka produktas apie PGR . Į išvalyti į PGR produktai , naudojama dydžio išskyrimo chromatografija.

Taip pat galima paklausti, ar prieš restrikcijos endonukleazės virškinimą reikėtų išvalyti PGR produktus? Didžioji dalis apribojimas fermentai yra aktyvūs PGR buferiai. Klonavimo programoms, valymas apie PGR produktai prieš virškinimą yra būtina pašalinti aktyvią termofilinę DNR polimerazę, esančią PGR mišinys. DNR polimerazės gali pakeisti suskaldytos DNR galus ir sumažinti ligavimo išeigą.

Žmonės taip pat klausia, kaip paruošiate PGR produktus sekos nustatymui?

Tiesioginis PGR produktų sekos nustatymas

  1. ĮSItikinkite, kad sustiprinote tinkamą fragmentą.
  2. Turite pašalinti visus likusius PGR pradmenis ir neįtrauktus nukleotidus.
  3. Jei PGR pradmenys taip pat bus sekos nustatymo pradmenys, įsitikinkite, kad jie atitinka mūsų sąlygas.
  4. Nekoncentruokite mėginio per daug!

Ar galite sekti PGR produktą?

Tiesioginis Sekos nustatymas apie PGR produktai . Sekos nustatymas naudoja tik vienas gruntas vietoj dviejų naudotų PGR . Jei taip nepašalinti abiejų gruntų, tu tai padarysi gauti du sekos uždėti vienas ant kito ir neįskaitomi. Gerai naudoti a PGR gruntas skirtas seka kol tai atitinka mūsų sąlygas.

Rekomenduojamas: