Turinys:

Kaip renkatės klonus?
Kaip renkatės klonus?

Video: Kaip renkatės klonus?

Video: Kaip renkatės klonus?
Video: Kaip Pagreitinti Savo Nešiojamą Kompiuterį? (+ Ekrano Keitimas) 2024, Lapkritis
Anonim

Kada pasirenkant a klonas , įsitikinkite, kad šaknys tvirtos, baltos ir noriai kyšo iš auginimo terpės. Jei šaknys rudos ir susitraukusios arba kitaip atrodo neaktyvios, sudėkite atgal ir ieškokite geresnio.

Be to, kaip klonuoti vieną ląstelę?

  1. Suskaičiuokite ląsteles, kad į 96 šulinėlių plokštelės, kurioje yra 200 µL terpės, pirmą šulinėlį (A1) būtų įdėta ~16 000 ląstelių.
  2. Pašalinkite 100 µL iš ląstelių, kuriose yra A1, ir sumaišykite su B1, pipete 3 kartus pipete padėkite aukštyn ir žemyn, kad gerai išmaišytumėte, prieš pašalindami 100 µL ir sumaišydami su C1 ir pan.

Be to, kaip pasirinkti žinduolių ląstelių koloniją? Padėkite plokštelę po mikroskopu, kad pasirinktumėte nediferencijuotus sveikus kolonijų . Rinkis kolonijas naudojant P-20 pipetę, nustatytą 10 ul. Atsargiai rinkti a kolonija nesuardant kolonija į vienišius ląstelės ir perkelkite į 96 šulinėlių plokštelę su tripsinu. Keletą kartų pipete braukite aukštyn ir žemyn, kad išsklaidytumėte kolonija.

Atitinkamai, kaip jūs naudojate klono cilindrą?

Naudojant sterilios vidutinės žnyplės, paimkite a klonavimo cilindras . Švelniai paspauskite plokščią dugną cilindras į sklandų silikoninį tepalą ir nuimkite staigiu vertikaliu judesiu. Jei tai daroma tinkamai, tepalas tolygiai pasiskirstys ant dugno cilindras . Nustatyti cilindras virš kolonijos.

Kaip pasirinkti kolonijas stabilioms ląstelių linijoms?

Stabilių ląstelių linijų generavimo protokolas reikalauja kelių žingsnių, kaip parodyta toliau:

  1. Sugeneruokite žudymo kreivę, kad nustatytumėte optimalią atrankos antibiotikų koncentraciją.
  2. Transfekuokite ląsteles norima (-omis) plazmidės konstrukcija (-omis)
  3. Pasirinkite ir išplėskite stabilias poliklonines kolonijas.
  4. Nustatykite atskirus klonus riboto praskiedimo ir išplėtimo būdu.

Rekomenduojamas: